環境監測的要求
歐盟 GMP 附則 1《無菌藥品的製造》中有關環境監測的要求（與舊版對比）¹，² 如下：
A. 最大允許懸浮微粒數標準
表 1 – 監測時最大允許懸浮微粒數標準對比
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級別 |
最大允許懸浮微粒數 ≥ 0.5 μm/m³ | 最大允許懸浮微粒數 ≥ 5 μm/m³ | ||||||
| 靜態 | 動態 | 靜態 | 動態 | |||||
| 舊版 | 新版 | 舊版 | 新版 | 舊版 | 新版 | 舊版 | 新版 | |
| A | 3520 | 3520 | 3520 | 3520 | 20 | 29 | 20 | 29 |
| B | 3520 | 3520 | 352 000 | 352 000 | 29 | 29 | 2900 | 2 930 |
| C | 352 000 | 352 000 | 3 520 000 | 3 520 000 | 2 900 | 2 930 | 29 000 | 29 300 |
| D | 3 520 000 | 3 520 000 | Not defined 未規定 | Not predetermined (a) 未事先確定 | 29 000 | 29 300 | Not defined 未規定 |
Not predetermined (a) 未事先確定 |
a. D 級區未預先確定動態限度。公司應根據風險評估和日常數據（適用時）制訂動態限度。
B. 微生物限度標準
表 2 – 環境監測時微生物限度標準對比
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Grade 級別 |
Air sample 空氣取樣 (cfu/m³) | Settle plates (diameter90 mm) 沉降碟 (Φ90 mm) (cfu/4 hours) | Contact plates (diameter55 mm) 接觸碟 (Φ55 mm) (cfu/plate) | Glove print, Including 5 fingers on both hands 手套印，包括雙手 5 指 (cfu/glove) | ||||
| 舊版 | 新版 | 舊版 | 新版 | 舊版 | 新版 | 舊版 | 新版 | |
| A | – | – | <1 (舊版) | No growth 不得生長 (新版) | – | – | – | – |
| B | 10 | 10 | 5 | 5 | 5 | 5 | 5 | 5 |
| C | 100 | 100 | 50 | 50 | 25 | 25 | – | – |
| D | 200 | 200 | 100 | 100 | 50 | 50 | – | – |
・A 級微生物的污染限度由＜1 改為不得生長（No growth）
・新版歐盟 GMP 附則 1指出：
- 沉降碟應在操作期間暴露於 A 級和 B 級區域（包括設備設置）；對於 C 級和 D 級區域，暴露時間（最多 4 小時）和頻率應基於品質風險管理
- 接觸碟限度適用於 A 級和 B 級區內的設備、房間和防護服表面。C 級和 D 級區通常不需要進行常規防護服監測，具體取決於其功能
- 應注意，對於 A 級，任何生長結果都應觸發調查
C. 關鍵操作的監測要求
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類別 |
舊版 | 新版 |
| 總體要求 | A 級監測應證明在關鍵操作中均維持了無菌製程條件。監測位置應為對無菌設備表面、容器、密封件和產品造成最高污染風險的位置。監測位置的選擇以及取樣裝置的定位和放置應證明合理，適合從關鍵區域獲取可靠的數據。 | |
| 環境 – 懸浮微粒 | 對於 A 級區，在關鍵製程（包括設備的組裝）的全過程中，應當對微粒進行連續監測。 | 對於 A 級，應在關鍵操作的全過程中（包括設備組裝）進行微粒監測。 |
| 環境 – 微生物監測 | 當實施無菌操作時，應採用諸如沉降碟法、定量空氣取樣和表面取樣 (例如棉籤或接觸碟) 等方法進行頻繁監測。 | 在實施無菌操作時，應聯用多種方法頻繁進行微生物監測，如沉降碟、定量空氣取樣、手套、防護服和表面取樣（例如，擦拭和接觸碟）。應在整個關鍵製程中對 A 級區（包括設備組裝（無菌設置）和充填操作）進行連續活性空氣監測（例如空氣取樣或沉降碟）。 |
| 表面 | 在關鍵操作後，應對人員和表面進行監測。在非生產操作狀態下（如在系統驗證、清潔或消毒之後），應進行額外的微生物監控。 | 在操作結束時應監測潔淨室和設備表面。所有加工的關鍵階段（包括設備安裝）都應對動態下潔淨室、潔淨空氣設備和人員進行常規監測。未進行正常生產操作的潔淨室（例如，消毒後、生產開始前、批完成時和停產後）以及未使用的相關房間，也應進行微生物監測，以發現可能影響潔淨室內控制的潛在污染事件。 |
| 人員 | 在關鍵操作後，應對人員和表面進行監測。 | 監測應包括在製程中定期進行人員監測取樣。對於人員監測，應特別考慮參與關鍵介入操作後（至少包括手套，但可能需要監測與製程相關的防護服（手套和防護服）以及每次離開 B 級潔淨室時）。如果在關鍵介入操作後監測手套，則應在繼續活動之前更換外層手套。如果在關鍵介入操作後需要監測防護服，則應在潔淨室進一步活動之前更換防護服。 |
| 取樣方法 | 動態的取樣方法應避免對潔淨區造成不良影響。 |
應在 CCS 中論證所使用的取樣方法的合理性，應證明不會對 A 級和 B 級的氣流流型造成不利影響。 |
有關環境監測的查核缺失
以下是從 FDA 近期發布的一些查核缺失中摘錄的有關環境監測的缺失及要求。
1. A 級區微粒超出分級限度的處理不合規 ³
要求：任何 A 級區微粒超出分級限度都應該啟動調查，而非基於持續時間長短；調查的程度應基於超標的微粒數和頻率。應分析微粒趨勢，評估對產品影響，採取必要的 CAPA 措施。此外，需對 A 級區微粒超標的批次進行回溯性審查，包括無菌操作過程中發生的偶發事件以及警報或停機等。
具體查核缺失如下：無菌充填過程中，A 級區出現微粒超標，然而並未進行調查，因為製藥企業認為微粒超標未超過程序所規定的持續時間。在無菌加工操作過程中，若≥0.5μm/ft³ 的 NVP（非活性微粒）數量超過你們的行動限度（不超過 (b)(4) 微粒數），你們缺乏適當的處理系統。生產線 (b)(4) 經常超出這些 ISO 5 限值。在 ISO 5 無菌加工操作中，你們例行作業中未對這些高微粒水準進行調查。
例如，在生產 (b)(4) 注射液（一種為美國市場生產的 (b)(4) 產品）時，充填站的 NVP 探針、(b)(4) 進瓶站的探針和加塞站的探針多次超出 NVP 計數限值。有一次，充填機因這些 NVP 警報而自動停機。在發生偏離時，沒有程序要求移除任何未封閉的產品容器。貴公司決定不進行調查，因為 ISO 5 警報沒有持續 (b)(4) 時間。ISO 5 環境中過多的微粒會導致無菌藥品受到非活性微粒或生物污染。
FDA 對其回覆的回應：製藥企業的回答不夠充分。未承諾解決啟動 NVP 偏差的不適當的 (b)(4) 時間範圍。使用任何基於時間範圍的標準來啟動 NVP 偏差都是不可接受的。任何超出分級限度的偏差或結果都應進行調查，且這些調查的程度應與偏離的幅度或頻率一致。你們還應該對數據進行趨勢分析，以辨識及評估危害並實施有效的 CAPA。此外，你們未承諾對 NVP 水準超 ISO 5 限值的所有批次進行回溯性審查，包括個別事件，以及在無菌處理期間發生警報或機器停止的情況。
2. 生產期間的微生物監測結果造假⁴
要求：微生物環境監測結果要滿足數據完整性的要求，稽查員會通過對培養箱內正在培養的培養皿數量核對、調閱影像監控系統的取樣過程、比對取樣人員進出無菌室記錄與相關的環境監測取樣和培養記錄是否一致進行檢查。
具體查核缺失如下：
a. 在 2023 年 10 月 12 日對微生物實驗室的培養箱進行檢查時，發現沒有環境監測和人員監測樣品，這些樣品本應在 (b)(4) 生產線和 (b)(4) 生產線的無菌生產過程中收集。記錄測試日期的日誌和培養箱使用日誌記錄了這些樣品，而這些樣品均不存在。缺失樣品的例子包括：
- 人員監測樣品，包括每天在無菌充填間工作的每個人的 (b)(4) 身體部位採集的 (b)(4) 培養皿和 (b)(4) 手指培養皿。從 2023 年 10 月 6 日至 11 日，無菌進入和退出日誌記錄應有大約 102 個培養皿（每個人包含 (b)(4) 個培養皿）處於培養狀態，但培養箱中僅有 3 個培養皿
- 與 (b)(4) 批次相關的充填後內部表面 (b)(4) 的所有擦拭樣品在 (b)(4) 中缺失
- 培養箱中缺失與 (b)(4) 批次相關的充填線 (b)(4) 中的浮游菌檢測樣品
- 培養箱缺少沉降菌樣
b. 對 (b)(4) 線 (b)(4) 房間的影像記錄的審查顯示，在 2023 年 10 月 3 日、4 日或 5 日並未收集 LAF 下 A 級的沉降菌和浮游菌樣品。
c. 審核無菌區域進入日誌，多次發現在生產期間沒有微生物檢測員在場採集環境和人員監測的樣品。例如，2023 年 10 月 4 日，在美國上市的 (b)(4) 批次生產期間，微生物檢測員直到清潔完成、充填操作員離開後才進入充填室。
d. 對影像記錄的審查顯示，2023 年 10 月 9 日微生物走廊中沒有暴露的沉降碟，儘管文件記錄了這些樣品的採集。
對從 (b)(4) 生產線外的 (b)(4) 房間進行拍攝的影像記錄進行了審查，發現攜帶式懸浮微粒計數器在 2023 年 10 月 5 日從未進入到 (b)(4) 充填區域中。一位微生物檢測員證實，樣品是從微生物實驗室的層流罩中收集的，列印結果顯示樣品是從 (b)(4) 中 A 級充填區內採集的。
3. 環境監測取樣計畫有缺失⁴
要求：透過風險評估建立全面的環境監測計劃，即取樣位置、監測頻率、監測方法和培養條件（如時間、溫度、需氧和 / 或厭氧條件）。描述要詳細，如對表面取樣，需說明哪個物品的哪個位置。
具體查核缺失如下：無菌加工區缺乏環境條件監測系統。考慮到例行無菌操作和介入措施，環境監測取樣位置尚未選定。尚未考慮的表面監測點包括 (b)(4) 用於執行介入 (b)(4) 料斗和 (b)(4) 軌道。此外，取樣描述不夠充分，無法確保取樣的可重複性。擦拭取樣包括取樣的位置，(b)(4) 沒有描述哪個 (b)(4) 或者在哪裡 (b)(4)。「鑷子」是一個擦拭取樣點，但在取樣時沒有指定或記錄多個鑷子中的哪一個。
4. A/B 級區黴菌污染，但處理效果不佳⁵
要求：A 級和 B 級區域的任何超出行動限度和趨勢的概述（不限於黴菌）、確定的根本原因，以及啟動的任何額外的 CAPA。
具體查核缺失如下：具體而言，在 2019 年 10 月至檢查日期之間，在 Kymriah 生產的 ISO 5/ A 級和 ISO 7/ B 級區域發生了約 100 次的黴菌超出行動限的事件，你們公司歸因為與生產區域的清潔和消毒、設備清潔和消毒、設備運輸、物料處理、人員著裝、潔淨室行為、洗手和衛生相關的程序存在缺失，以及未能遵守其中一些程序。你們實施了至少 15 項 CAPA 來解決黴菌問題，包括最近的一次是在 2022 年 10 月 12 日。儘管有這些 CAPA，你們的 A 級生產區域直到 2022 年 10 月 21 日仍繼續發現了黴菌，B 級生產區域直到 2022 年 11 月 18 日仍發現了黴菌。
FDA 對其回覆的回應：你們的回應沒有說明你們最近於 2022 年 10 月 12 日實施的 CAPA（你們稱之為「全面的」）是否對防止 B 級黴菌的出現有效。請提供自 2022 年 10 月 12 日以來 A 級和 B 級區域的任何超出行動限度和趨勢的概述（不限於黴菌）、確定的根本原因，以及啟動的任何額外的 CAPA。
5. 無菌加工區環境監測系統方面存在缺失⁶
要求：環境監測中監測位置的變更、限度的設定、偏差調查和處理缺乏充分的科學依據。
具體查核缺失如下：查核發現事項 2：無菌加工區域在環境條件監測系統方面存在缺失。具體來說：
A. 無菌加工區域在環境條件監測系統方面存在缺失。無法為以下內容提供充分的科學依據：
- 變更管制 BIC 295/22（日期為 2022 年 6 月 30 日）有關更換位於 RAB（XX）中 NVPC 探針位置的變更。探針被移至 XXX RABs 的對面，遠離操作人員的活動，並比之前的位置升高約 XXX。
- 將非活性微粒 (NVP) 限度設定為以下數值：
- 充填 / 密封設備的組裝：非活性微粒 (NVP) 異常未經調查，也未進行影響評估。
- 充填：當 NVP 監測系統顯示偏離＞(b)(4) 時，未調查 NVP 偏離原因，未進行影響評估，對於暴露的瓶子也未剔除。BFI-PD-079 在線微粒計數器操作程序中聲稱偏離≤(b)(4) 時不需要調查，並且暴露的瓶子也不需要剔除。NVP 偏離僅對偏離超過 (b)(4) 時或 (b)(4) 連續 (b)(4) 個警報事件的最小值時才需要調查和剔除暴露的小瓶。
- 密封：NVP 偏離≤(b)(4) 不進行調查，不進行影響評估，也不剔除暴露的小瓶。僅偏離發生次數超過 (b)(4) 次且持續時間超過 (b)(4) 或 (b)(4) 中最少的連續警報事件 (b)(4) 超過 (b)(4) 次將啟動調查並剔除已打開和暴露的小瓶。密封活動大約持續 (b)(4)。
B. A 級區域的無菌操作在離開無菌區域時按 B 級標準進行。儘管操作員操作打開 (b)(4) 設置 (b)(4)，並在整個充填過程中站在擴展 A 級區域中，但在無菌區 (b)(4) 的更衣人員監測時，這些操作員採用 B 級更衣規範 (b)(4) CFU / 皿。
主要參考文獻
[1] EC EudraLex – Volume 4 GMP guidelines Annex 1 Manufacture of Sterile Medicinal Products, 2008
[2] EC EudraLex – Volume 4 GMP guidelines Annex 1 Manufacture of Sterile Medicinal Products, 2022
[4] https://www.fda.gov/media/174223/download?attachment
